紫外检测器在液相色谱仪检测中的应用

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紫外检测器在液相色谱仪检测中的应用

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紫外检测器在液相色谱仪检测中的应用

    紫外检测器是液相色谱仪中应用最广泛的检测器,当检测波长范围包括可见光时,又称为紫外-可见检测器。紫外吸收检测器不仅灵敏度高、噪音低、线性范围宽、有较好的选择性,而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感,因此可用于对光吸收小、消光系数低的物质进行微量分析。既可用于等度洗脱,也可用于梯度洗脱。紫外检测器对流速和温度均不敏感,可于制备色谱。其中要注意流动相中各种溶剂的紫外吸收截止波长,如果溶剂中含有吸光杂质,则会提高背景噪音,降低灵敏度。此外,梯度洗脱时,还会产生漂移。

    紫外检测器的工作原理是:当一束单色光透过流动池时,若流动相不吸收光,则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。可用公式表示为:A=lg=lg=ECL(式中I0为入射光强度,I为透射光强度,T为透光率,E为吸收系数)。其依据是光吸收定律,从光源发出的光经狭缝、滤光片、样品池到光电培增管上,使束由于样品浓度不同所引起光强的变化转换成光电流的变化,此光电流经放大器输入到对数转换器,使透光率T转成A输出。根据上式就知测出了A,就知样品浓度C。若从放大器直接输入记录仪,绘出的是样品透光率T变化的图谱,若从对数转换器输入到记录仪绘出的是样品光密度A变化的图谱。

    紫外检测器分为固定波长检测器、可变波长检测器和光电二极管阵列检测器。按光路系统来分,紫外检测器可分为单光路和双光路两种。可变波长检测器又可分单波长(单通道)检测器和双波长(双通道)检测器。PDAD是80年代出现的一种光学多通道检测器,它可以对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后,得到光谱和色谱结合的三维图谱。其中吸收光谱用于定性(确证是否是单一纯物质),色谱用于定量。常用于复杂样品(如生物样品、中草药)的定性定量分析。

    在使用紫外检测器分析检测注意事项以下以保证检测器的灵敏度。

   1. 氘灯的光强受温度和电压影响较大,建议在恒温室内工作或者在冰库里工作;

   2. T调零生产时机内已校准,当更换光电培增管后,需重新校准;

   3. 氘灯寿命可达数千小时,若发现记录仪不能调到10mV,且基线一直往小的方向漂移要考虑换灯。如氘灯不亮可再按一次电源开关,氘灯就会即亮,光电培增管寿命在数千小时以上。注意开机工作时不得拿出样品池架,以免强光照射光电培增管造成损坏。氘灯发光区域和光电培增管光阴极窗口沾污时,可用干净棉芯酒精擦拭干净。

单位名称:武汉恒信世纪科技有限公司

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